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哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件

导语:哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取,原代培养,传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。

哺乳动物细胞培养过程
哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取,原代培养,传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述:
原代培养:从动物机体取出组织后切碎,经过各种酶(常用胰蛋白酶),螯合剂(常用EDTA)结合机械方法(吸液管反复吸吹)处理,分散成单细胞,置于合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养,到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。

经过原代细胞培养,细胞分裂繁殖,培养物逐渐增多长满培养空间,继而相互之间接触,发生接触抑制现象,生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传(继)代培养。
传(继)代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传(继)代培养。
细胞系:初代培养物开始第一次传代培养后的细胞,即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限,则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力,能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。
细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系,用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增值形成的细胞群,称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群,成为亚株。

哺乳动物细胞培养条件
不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养,都需要有基础的培养条件,归纳如下:
1、无菌无毒的环境:对培养液和所有培养用具无菌处理;培养液中添加抗生素防止培养过程中污染;定期更换培养液以清除代谢产物,防止对培养细胞造成危害。
2、营养:液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等;通常还需加入血浆、血清等天然成分
3、适宜的温度和pH:人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。
4、气体环境:气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体,CO2维持培养液pH。

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